edc是什么化学试剂的简称 edc是什么化学材料
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固相合成多肽的聚合物载体及连接分子
1.聚合物载体固相合成肽需要一个固相载体和一个将固相与反应物连接起来的接头。固相合成的成功取决于载体和连接体的正确选择。用于固相合成肽的载体多为聚苯乙烯及二乙烯基苯和苯乙烯共聚物等高聚物的衍生物，如氯 树脂、Pam树脂、王氏树脂和氨基树脂等.树脂的溶胀状态对缩合试剂和羧基组分的自由扩散、肽链间的聚集及其他与缩合反应有关的因素有明显的影响。为了使载体具有良好的溶胀性能，有足够大的网络空间容纳不断增长的较长肽链，便于反应物进入载体内部，一般采用交联度为1% ~ 2%的聚苯乙烯珠树脂或微孔树脂。
2.连接分子固相合成肽使用了与不同连接分子结合的聚合物，这些连接分子是含有氯甲基、巯基甲基、酰氯、对苯甲酰基、芳基磺酰氯、烯丙基、琥珀酰基、邻硝基苯甲醇和二苯基氯硅烷的双功能化合物。一个理想的接头分子在整个合成过程中必须非常稳定，并且合成后可以定量切割，不会破坏合成的目标分子。根据与树脂连接的肽的C-末端的结构类型，合适的接头分子应该被切割以产生相应的衍生物，例如羧酸、酰胺或氨基醇。
固相合成多肽的检测
即使偶联技术高效，也不能保证100%的酰化反应。此外，当遇到空间位阻或 2层状序列时，偶联反应的效率大大降低。聚合物载体上总有缺失或截短的多肽链，它们在释放时也会进入产品，给分离带来很大困难。所以固相肽合成时每个氨基酸的缩合率都要达到99.9%，尤其是长肽，否则产品会很不纯。因此，监控每个反应步骤的进展非常重要。(杭州专肽生物有20多年的固相合成经验，可以满足大部分客户的需求。)
1 定性颜色反应茚三酮比色法(Kaiser法)是通过茚三酮显色反应快速测定树脂上的氨基，从而判断酰化反应是否完全。茚三酮法检测聚苯乙烯树脂中氨基的灵敏度可达5 mol/g，以此灵敏度可检测缩合反应是否超过99%。检测茚三酮时，由于末端氨基酸残基和序列的不同，颜色强度也不同。天冬氨酸(Asp)和天冬酰胺(Asn)会产生淡蓝色或浅棕色。显色剂2，4，62三硝基苯磺酸与树脂上的氨基反应呈橙红色，灵敏度为5mol/g树脂。
Kaiser试剂包括：
a、6%茚三酮的乙醇溶液
b、80%苯酚的乙醇溶液
c、2%0.001MKCN的2%吡啶溶液
制备的吡啶需要用茚三酮处理，然后重新蒸熟后才能使用。检测过程中，取少量树脂，分别加入A、B、C各2-3滴，100加热1-2分钟。如果溶液呈蓝色，或者树脂呈蓝色或红棕色，说明还有游离氨基；否则，连接完成。检测游离氨基还有其他方法：三硝基苯磺酸法、苦味酸法、溴芬法等。
可用于测定肽接枝2 定量自由氨基检测 水杨醛法 后树脂上残留氨基的量和脱保护基后氨基的总量，并可定量检测缩合反应和脱保护基反应是否完全。如果不完整，可以及时反复处理。2%水杨醛和6%吡啶乙醇溶液与树脂上的氨基反应(60，30 ~ 35分钟)。清洗后，用5%苄胺乙醇溶液代替水杨醛(60，30分钟)。用苄胺乙醇溶液稀释后，在315nm处读取光吸收值，计算氨基数量(=4.36对于NH2大于0.15mol/mg树脂的样品，该方法的相对偏差小于5%。
在3 HPLC检测部分保护的中间肽多肽的合成过程中，将少量的肽树脂(3 ~ 10 mg)裂解，用乙醚沉淀，溶解在适当的溶剂中，直接进行高效液相色谱分析。当肽I
反应溶剂
二甲基甲酰胺(DMF)和二氯甲烷(DCM)是多肽固相合成中常用的溶剂，尤其是DMF因其对反应产物和产物的高溶解性而被广泛应用于许多反应体系中。DMF虽然溶解度较好，但沸点较高，需要减压蒸发。此外，副产物N-酰基脲在高介电常数的溶剂中容易产生[〔DMF，乙腈(CH3CN)，二甲基亚砜(DMSO)，H2O等。]，而在低介电常数的溶剂(CH2Cl2、CCl4、C6H6等)中不易产生。).在非极性溶剂中，N-保护氨基酸能迅速与DCC反应生成对称酸酐。所以只要能溶解反应物，就尽量选择介电常数低的溶剂。在固相合成中，DCM多用作溶剂，它有两个优点：比DMF消旋率小，N-酰基脲生成慢。当羧基成分难以溶解时，可以加入几滴再蒸的DMF帮助溶解。
缩合试剂主要有:碳化二亚胺型，盐型(脲)
碳二亚胺型
主要有DCC、DIC、EDC。HCl等。将DCC用于反应，并将反应中产生的DCU溶解在DMF中。
度很小，产生白色沉淀，所以一般不用在固相合成中，但是由于其价格便宜，在液相合成中，可以通过过滤除去，应用仍然相当广泛。EDC.HCl因为其水溶解性的特点，在多肽与蛋白的连接中使用比较多，而且也相当成功。但是该类型的缩合试剂的一个最大的缺点，就是如果单独使用，会有比较多的副反应，但是研究表明如果在活化过程中添加HOBt，HOAt等试剂，可以将其副反应控制在很低的范围。鎓盐型
鎓盐型缩合试剂反应活性高，速度快，现在使用非常广泛，主要包括：HBTU，TBTU，HATU，PyBOP等。该试剂使用过程中需要添加有机碱，如，二异丙基乙胺（DIEA），N-甲基吗啉（NMM），该试剂加入后，才能活化氨基酸。
固相合成过程
1、羟基树脂为载体的合成方法（Wang树脂为例：图1）
Wang树脂、PAM树脂、HMPA树脂、Sasrin树脂等均在Linker结构中含有苄醇基。多数情况下把预制的N一保护氨基酸的对称酸酐及催化剂DMAP(对二甲氨基吡啶)与羟基树脂一起反应。在这种成键反应中。DMAP是必需的，但也由此带来一些麻烦。例如，当某些位阻较大、反应活性较低的Fmoc-氨基酸需要较长的反应时间，而且DMAP的纯度又不理想时。会发生部分Fmoc基被脱除，生成部分二肽的麻烦。更常见的危险是当Cys及His作为C端第一个氨基酸与羟基树脂反应时，DMAP往往使这两种氨基酸发生消旋化。对此，解决办法是改用Cl-Trt树脂与这两种氨基酸键合，同样可以生成酯型Linker。另一种解决办法是用MSNT试剂
图1 固相多肽合成
2.以三苯甲基树脂树脂为载体的合成方法（图2）
三苯甲基(trt)树脂含有三重苄基结构，因此反应活性极高。一般用等摩尔量的保护氨基酸及4倍量的DIEA与Trt树脂混在二氯甲烷中，室温反应30-12Omin即达完全。对于未反应完全的位点，可用甲醇封住位点。基于Trt Linker的温和键合及温和裂解特点，在此种树脂上进行肤片段缩合及全保护基肤片段制备是较理想的方式。
图2 固相多肽合成
FMOC固相合成Glu-Trp
3以氨基树脂为载体的合成方法
MBHA树脂、PAL树脂、Knorr树脂、Rink-NH2树脂等均在Linker中含有可与羧酸反应的氨基。C端第一个氨基酸与之键合的反应条件与接肽循环中的操作完全相同。如果以DCC为缩合剂，一般先将N-保护氨基酸与DCC、HOBT混于溶剂(DMF、THF、DCM等)中，生成氨基酸的HOBT活泼酯，放置3-5h，待活化反应基本完全后滤除副产物DCU沉淀，把羧基活化组分溶液与氨基树脂混合进行键合反应。此步反应有两点事项值得注意:①多数氨基树脂的氨基并非以游离状态出售。有的氨基是以盐酸盐的形式，有的则带有临时保护基(如Fmoc , Boc等），因此在与C端第一个氨基酸键合之前必须进行相应的中和或脱除临时保护基的处理;②氨基酸活化组分的用量应大大高于氨基树脂组分，一般的摩尔比为（2-5）：1，目的是使键合反应接近100% ,因为未被酰化的氨基树脂无法从产物中清除出去。使用大大过量的构件是所有固相有机合成的共同之处。
除了DCC之外，其他常见的缩合剂还有DIC、EDC、EEDQ、HBTU等。
原文链接：https://pic.qubaike.com/pic/2023-03-25/2uv2p52ckmb
